热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-D136P及其制备方法

本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE?D136P及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；利用多种生物信息学软件分析淘汰结构不合理的突变体；从结构合理的突变体中，筛选具有脯氨酸效应的突变体，进一步分析：突变氨基酸残基的相对溶剂表面积（大于50%）和突变位点氨基酸残基在370K和300K下的RMSF值的差值（大于零）。利用上述方法构建筛选热稳定性胆固醇酯酶突变体，阳性突变体频率高达66.7%，有效降低筛选工作量；获得的突变体OPE?D136P的失活半衰期较野生型OPE延长3.6倍。