热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-A355E/T383E及其制备方法

本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE?A355E/T383E及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；利用YASARA等软件分析淘汰结构不合理的突变体；对具有盐桥效应的突变体，利用生物信息学软件分析其相对溶剂表面积、形成盐桥的氨基酸残基之间的间隔距离等，筛选符合要求的突变体，组成微型突变电子文库。利用定点突变技术，实验评估、验证突变效应。利用上述方法构建热稳定性胆固醇酯酶突变体，阳性突变体频率高达52.4%，有效降低筛选工作量；获得的突变体的半衰期延长10.5倍。